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对香豆酰辅酶A酯生物合成及纯化方法

潘琛 任百光 盖颖

潘琛, 任百光, 盖颖. 对香豆酰辅酶A酯生物合成及纯化方法[J]. 北京林业大学学报, 2016, 38(3): 120-124. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
引用本文: 潘琛, 任百光, 盖颖. 对香豆酰辅酶A酯生物合成及纯化方法[J]. 北京林业大学学报, 2016, 38(3): 120-124. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
PAN Chen, REN Bai-guang, GAI Ying. Method of enzymatic synthesis and purification of p-coumaroyl-CoA[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2016, 38(3): 120-124. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
Citation: PAN Chen, REN Bai-guang, GAI Ying. Method of enzymatic synthesis and purification of p-coumaroyl-CoA[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2016, 38(3): 120-124. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366

对香豆酰辅酶A酯生物合成及纯化方法

doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
基金项目: 

国家自然科学基金青年项目(NSF 31300498)

详细信息
    作者简介:

    潘琛,博士生。主要研究方向:结构生物学。Email:pc.18023@hotmail.com 地址:100083 北京市海淀区清华东路 35 号北京林业大学生物学院。
    责任作者: 盖颖,博士,副教授。主要研究方向:树木生长发育。Email:gaiying@bjfu.edu.cn 地址:同上。

    潘琛,博士生。主要研究方向:结构生物学。Email:pc.18023@hotmail.com 地址:100083 北京市海淀区清华东路 35 号北京林业大学生物学院。
    责任作者: 盖颖,博士,副教授。主要研究方向:树木生长发育。Email:gaiying@bjfu.edu.cn 地址:同上。

Method of enzymatic synthesis and purification of p-coumaroyl-CoA

  • 摘要: 木质素是绿色植物生长发育所需的重要化合物之一。肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)是在木质素合成过程中,催化苯丙烷类合成途径第1步的关键酶。本文以其底物之一——对香豆酰辅酶A酯为例,以现有的辅酶A酯合成纯化的文献报道为参考,介绍经过整合改进并不断试验而得到的CCR底物的合成与纯化方法。从大肠杆菌中提取出来的重组酶4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)用于合成CCR底物,这比从植物组织中提取更易获得。提纯后的4CL可以在-80 ℃下保存3、4个月。4CL反应后的产物在2个不同梯度下通过C18反相柱进一步纯化,并用高效液相色谱仪监测。在整个纯化过程中,所有用于装载对香豆酸和对香豆酰辅酶A酯的容器都用锡箔纸完全包裹起来。最后提纯出来的产物用质谱和核磁共振检测。检测的结果表明,提纯出来的辅酶A酯单一性非常好。

     

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出版历程
  • 收稿日期:  2015-10-15
  • 刊出日期:  2016-03-31

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