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白桦BpGT14基因启动子克隆及表达活性分析

李蕾蕾 孙丰坤 李天宇 寇萍 詹亚光 曾凡锁

李蕾蕾, 孙丰坤, 李天宇, 寇萍, 詹亚光, 曾凡锁. 白桦BpGT14基因启动子克隆及表达活性分析[J]. 北京林业大学学报, 2016, 38(7): 16-24. doi: 10.13332/j.1000-1522.20160027
引用本文: 李蕾蕾, 孙丰坤, 李天宇, 寇萍, 詹亚光, 曾凡锁. 白桦BpGT14基因启动子克隆及表达活性分析[J]. 北京林业大学学报, 2016, 38(7): 16-24. doi: 10.13332/j.1000-1522.20160027
LI Lei-lei, SUN Feng-kun, LI Tian-yu, KOU Ping, ZHAN Ya-guang, ZENG Fan-suo.. Cloning and activity analysis of BpGT14 gene promoter in Betula platyphylla.[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2016, 38(7): 16-24. doi: 10.13332/j.1000-1522.20160027
Citation: LI Lei-lei, SUN Feng-kun, LI Tian-yu, KOU Ping, ZHAN Ya-guang, ZENG Fan-suo.. Cloning and activity analysis of BpGT14 gene promoter in Betula platyphylla.[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2016, 38(7): 16-24. doi: 10.13332/j.1000-1522.20160027

白桦BpGT14基因启动子克隆及表达活性分析

doi: 10.13332/j.1000-1522.20160027
基金项目: 

中央高校基本科研业务费专项 (2572014DA04)、国家自然科学基金项目(31200463、J1210053)。

详细信息
    作者简介:

    李蕾蕾。主要研究方向:植物基因工程。Email:lileileimoon@126.com地址:150040黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号东北林业大学生命科学学院。责任作者:曾凡锁,副教授。主要研究方向:林木遗传育种和生物技术。Email:zengfansuo@126.com地址:同上。

    李蕾蕾。主要研究方向:植物基因工程。Email:lileileimoon@126.com地址:150040黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号东北林业大学生命科学学院。责任作者:曾凡锁,副教授。主要研究方向:林木遗传育种和生物技术。Email:zengfansuo@126.com地址:同上。

Cloning and activity analysis of BpGT14 gene promoter in Betula platyphylla.

  • 摘要: 本文利用SiteFinding-PCR方法克隆了白桦BpGT14基因起始密码子ATG上游2 169 bp序列,并通过PLACE启动子预测工具对其进行元件分析。结果表明,该启动子片段含有启动子核心元件及多种逆境及激素响应元件,同时具有植物苯丙烷及木质素生物合成的MYB类转录因子的重要结合基序。研究选取了其中含有启动子核心元件的1 156 bp片段构建了pBpGT14∷GUS植物表达载体,利用农杆菌侵染的方法将pBpGT14∷GUS报告基因瞬时转化烟草植株,鉴定该启动子在烟草中的表达活性及对非生物胁迫和激素的响应模式。对转基因烟草植株进行GUS染色,结果表明该启动子具有启动活性,且在茎段处活性较高;进一步分析非生物胁迫对烟草中GUS酶活性的影响,表明该启动子对ABA、NaCl、PEG及高温处理均有明显响应,且对于NaCl及PEG处理响应迅速。为了更好的鉴定白桦BpGT14基因启动子在白桦细胞中的启动活性及响应模式,本文构建了pBpGT14∷GFP载体并瞬时转化白桦茎段悬浮细胞,进行研究。GFP转录水平分析结果与GUS酶活性结果基本一致,但其中部分时间点仍存在差异。选取PEG处理3、6、12及24 h的转GFP基因白桦茎段悬浮细胞,在显微镜下观察其绿色荧光蛋白,以此揭示该启动子对干旱的响应模式。结果表明,该启动子在白桦茎段悬浮细胞中启动了GFP的表达,在处理初期(3 h),荧光效果明显;随着处理时间的增加,细胞脱水明显,且在细胞壁表现高亮度荧光。

     

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  • 收稿日期:  2016-01-20
  • 刊出日期:  2016-07-30

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