沙棘木蠹蛾AFLP引物筛选及反应体系的建立

Selection of primers and establishment of AFLP analysis system on Holcocerus hippopaecolus.

摘要: 该文以沙棘木蠹蛾幼虫为材料，用改进的SDS-蛋白酶K法获得了高质量的符合AFLP分析要求的基因组DNA。通过对AFLP试验过程中的酶切连接、预扩增、选择性扩增等各关键因素的比较研究，建立了一套优化的沙棘木蠹蛾AFLP分子标记体系，获得了清晰的指纹图谱。研究结果表明：利用EcoRⅠ/MseⅠ双酶切系统以酶切连接2～4 h, 预扩增产物稀释20倍、Mg 2+浓度为1.5 mol/mL的选择性扩增效果最好。进一步利用该反应体系从80对E+3 /M+3选择性引物中筛选出10对多态性丰富、分辨率高、谱带清晰的引物组合。该研究结果为利用AFLP标记技术开展沙棘木蠹蛾的种群遗传结构、遗传分化等方面的研究奠定了基础。