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李绍才, 陈文汇, 范丙友, 朱教君, 金小娟, 时尽书, 吕建雄, 翟明普, 胡晓丽, 李世东, 孙晓梅, 王玉杰, 高峻, 谭伟, 窦军霞, 肖生春, 李发东, 杨振德, 潘存德, 颜容, 南海龙, 张冰玉, 徐双民, 张宇清, 周春江, 康宏樟, 冯仲科, 谢益民, 张一平, 三乃, 孟平, 韩海荣, 李建章, 刘红霞, 田小青, 孙海龙, 张守攻, 刘俊昌, 师瑞峰, 骆秀琴, 王云琦, 朱清科, 宋献方, 胡诗宇, 苏晓华, 肖洪浪, 蔡怀, 岳良松, 王笑山, 吴斌, 陆海, 马钦彦, 李义良, 赵博光, 姜伟, 杨志荣, 张雁, 周文瑞, 蒋佳荔, 刘昌明, 齐实, 齐实, 赵双菊, 李智辉, 何磊, 张劲松, 蒲俊文, 张永安, 宋清海, 蒋湘宁, 赵有科, 伊力塔, 朱金兆, 姚山, 葛颂, 齐力旺, 张德荣, 张岩, 于静洁, 刘元, 褚建民, 石丽萍, 杨聪, 吕守芳, 吴庆利, 曲良建, 康峰峰, 马超德, 崔保山, 刘鑫宇, 王玉珠, 王建华, 朱林峰, 刘相超, 胡堃, 田颖川, 唐常源. 毛白杨4-香豆酸: 辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测[J]. 北京林业大学学报, 2006, 28(2): 1-8.
引用本文: 李绍才, 陈文汇, 范丙友, 朱教君, 金小娟, 时尽书, 吕建雄, 翟明普, 胡晓丽, 李世东, 孙晓梅, 王玉杰, 高峻, 谭伟, 窦军霞, 肖生春, 李发东, 杨振德, 潘存德, 颜容, 南海龙, 张冰玉, 徐双民, 张宇清, 周春江, 康宏樟, 冯仲科, 谢益民, 张一平, 三乃, 孟平, 韩海荣, 李建章, 刘红霞, 田小青, 孙海龙, 张守攻, 刘俊昌, 师瑞峰, 骆秀琴, 王云琦, 朱清科, 宋献方, 胡诗宇, 苏晓华, 肖洪浪, 蔡怀, 岳良松, 王笑山, 吴斌, 陆海, 马钦彦, 李义良, 赵博光, 姜伟, 杨志荣, 张雁, 周文瑞, 蒋佳荔, 刘昌明, 齐实, 齐实, 赵双菊, 李智辉, 何磊, 张劲松, 蒲俊文, 张永安, 宋清海, 蒋湘宁, 赵有科, 伊力塔, 朱金兆, 姚山, 葛颂, 齐力旺, 张德荣, 张岩, 于静洁, 刘元, 褚建民, 石丽萍, 杨聪, 吕守芳, 吴庆利, 曲良建, 康峰峰, 马超德, 崔保山, 刘鑫宇, 王玉珠, 王建华, 朱林峰, 刘相超, 胡堃, 田颖川, 唐常源. 毛白杨4-香豆酸: 辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测[J]. 北京林业大学学报, 2006, 28(2): 1-8.
DOU Jun_xia, SHI Jin-shu, LIU Xin-yu, HU Kun, ZHANG Yi_ping, LI Jian-zhang, ZHAO Shuang_ju, TANG Chang_yuan, ZHOU Wen-rui, JING Yu-dong, ZHANG De-rong, SONG Qing_hai, 3, MA Chao-de, WU Qing-li, XU Shuang-min, 8, . Soluble prokaryotic expression of 4_coumarate: coenzyme A ligase from Populus tomentosa and enzyme activity of recombinant 4CL1[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2006, 28(2): 1-8.
Citation: DOU Jun_xia, SHI Jin-shu, LIU Xin-yu, HU Kun, ZHANG Yi_ping, LI Jian-zhang, ZHAO Shuang_ju, TANG Chang_yuan, ZHOU Wen-rui, JING Yu-dong, ZHANG De-rong, SONG Qing_hai, 3, MA Chao-de, WU Qing-li, XU Shuang-min, 8, . Soluble prokaryotic expression of 4_coumarate: coenzyme A ligase from Populus tomentosa and enzyme activity of recombinant 4CL1[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2006, 28(2): 1-8.

毛白杨4-香豆酸: 辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测

Soluble prokaryotic expression of 4_coumarate: coenzyme A ligase from Populus tomentosa and enzyme activity of recombinant 4CL1

  • 摘要: 为了进一步研究毛白杨4CL1的酶学特性,构建了毛白杨4CL1原核表达载体pQE31-4CL1.经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了毛白杨4CL1蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明该新蛋白的分子量为60 kD,与预测值一致.对毛白杨4-CL1蛋白在大肠杆菌中的表达体系进行了优化,确定IPTG的最佳浓度为0.4 mmol/L,诱导时的菌液密度OD600为0.3~0.5,最佳表达时间为2 h.37℃下表达的4CL1融合蛋白以包涵体的形式存在,没有生物学活性.当表达温度从37℃降低为28℃时,可溶性的有生物学活性的毛白杨4CL1蛋白诱导表达获得成功,表达量达11%.以耦联有Ni2+-NTA的琼脂糖为亲和层析填料,金属鳌合亲和柱层析一步纯化获得了电泳纯4CL1蛋白,4CL1蛋白对5种底物的比活性分别为:4-香豆酸3 949.0 pkat/mg,咖啡酸2 214.0 pkat/mg,阿魏酸715.0 pkat/mg,肉桂酸84.9 pkat/mg,而对芥子酸没有生物活性.
  • [1] 张晋岚, 张祥雪, 冉苒, 伍敏, 吴尚, 贾黎明.  基于植物分割理论的毛白杨干旱落叶研究 . 北京林业大学学报, 2020, 42(9): 19-27. doi: 10.12171/j.1000-1522.20190411
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    [17] 奚如春, 陆平, 周艳萍, 郑景明, 吕文华, 于文吉, 雷妮娅, 刘足根, 焦雯珺, 于海霞, 索安宁, 武林, 李黎, 郎璞玫, 张春晓, 张志山, 周睿, 高克昌, 宋先亮, 孙志蓉, 李俊, 金则新, 张建军, 邵杰, 许景伟, 吴家兵, 马玲, 朱教君, 赵秀海, 马履一, 戴伟, 蔡锡安, 赵文喆, 习宝田, 毕华兴, 翟明普, 陈少良, 赵广杰, 张小由, 李钧敏, 饶兴权, 朱清科, 李传荣, Kwei-NamLaw, 于志明, 韦方强, 余养伦, 郑红娟, 盖颖, 葛剑平, 纳磊, 陈勇, 关德新, 张春雨, 夏良放, 曾小平, 杨永福, 赵平, ClaudeDaneault, 方家强, 李俊清, 朱艳燕, 李笑吟, 王瑞刚, 于波, 樊敏, 张宇清, 崔鹏, 袁小兰, 张弥, 马履一, 王天明, 王文全, 江泽慧, 谭会娟, 李增鸿, 贾桂霞, 王贺新, 殷宁, 贺润平, 张欣荣, 袁飞, 唐晓军, 李庆卫, 邓宗付, 刘丽娟, 王卫东, 李丽萍, 郭孟霞, 何明珠, 吴秀芹, 韩士杰, 陈雪梅, 蒋湘宁, 吴记贵, 于贵瑞, 郑敬刚, 毛志宏, 江杰, 王月海, 熊颖, 王旭琴, 刘鑫, 孔俊杰, 王娜, 孙晓敏, 聂立水, 王贵霞, 葛剑平, 王瑞辉, 林靓靓, 李新荣, 郭超颖, 董治良.  亚热带不同人工林对土壤酶活性及其动力学特征的影响 . 北京林业大学学报, 2007, 29(1): 114-118.
    [18] 杨平, 高黎, 李瑞, 王芳, 黄荣凤, 郑小贤, 白岗栓, 胡胜华, 毛俊娟, 何亚平, 周永学, 张莉俊, 颜绍馗, 胡万良, 殷亚方, 袁怀文, 魏潇潇, 张璧光, 秦爱光, 王费新, 吴彩燕, 刘杏娥, 邓小文, 张洪江, 王兆印, 杜社妮, 张岩, 崔赛华, 王正, 王晓欢, 王胜华, 常旭, NagaoHirofumi, 李猛, 费世民, 刘燕, 赵天忠, 樊军锋, 王小青, 谭学仁, 张克斌, 罗晓芳, 戴思兰, 汪思龙, 孙向阳, 乔建平, 李昀, 张占雄, KatoHideo, 江泽慧, 徐嘉, 张旭, 陈放, 韩士杰, , 王海燕, 刘云芳, 江玉林, 高荣孚, 范冰, 龚月桦, 张双保, 孔祥文, 李华, 杨培华, 常亮, 李媛良, 陈秀明, 丁磊, 侯喜录, 陈宗伟, , 刘秀英, 任海青, 郭树花, IdoHirofumi, 李晓峰, 薛岩, , 徐庆祥, 高建社, 费本华, 李考学, , 蒋俊明, 张代贵, 陈学平, 张桂兰, 刘永红, 王晓东, 涂代伦, 续九如, 李雪峰, , 金鑫, , 张红丽, , 丁国权, .  毛白杨巯基蛋白酶抑制剂基因cDNA的克隆及序列分析 . 北京林业大学学报, 2007, 29(6): 23-28.
    [19] 李在留, 周章义, 孙青, 贺窑青, 范丙友, 郝晨, 李艳华, 欧阳杰, 刘丽, 胡晓丹, 乔海莉, 刘美芹, 雷庆哲, 熊丹, 段旭良, 程堂仁, 王莉, 胡海英, 金莹, 曲红, 石娟, 张玲, 王丰俊, 姚娜, 陈佳, 隋金玲, 孙月琴, 李莉, 郑彩霞, 周燕, 续九如, 李凤兰, 张香, 骆有庆, 冯秀兰, 郭锐, 孙爱东, 田呈明, 冯菁, 张德权, 李云, 张志毅, 赵亚美, 骆有庆, 尹伟伦, 阎伟, 陈发菊, 张艳霞, 尹伟伦, 王建中, 武彦文, 沈昕, 陆海, 路端正, 陈晓阳, 康向阳, 吴晓成, 孙爱东, 蒋湘宁, 高述民, 史玲玲, 姜金仲, 李忠秋, 梁华军, 王华芳, 郑永唐, 王晓东, 骆有庆, 赵蕾, 武海卫, 郝俊, 马钦彦, 安新民, 卢存福, 梁宏伟, 骆有庆, 胡晓丹, 沈繁宜, 阎晓磊, 胡德夫, 王百田, 张志翔, 崔彬彬
    , 王华芳, 谢磊, 高荣孚, 邹坤, 赵兵, 王瑛, 李凯, 王冬梅, 王晓楠, 于京民2, 冯仲科, 吴坚, 尹伟伦, 骈瑞琪, 严晓素, 王建中, 郭晓萍, 冯晓峰, 王玉兵, 温秀凤3, 刘玉军, 丁霞, 张兴杰, 陶凤杰, 王玉春, 孙建华, 张庆, 刘玉军, 李镇宇, 李凤兰, 王民中, 刘艳, 杨伟光, 沈应柏, 林善枝, 陈卫平, 呼晓姝, 汪植, 马建海, 付瑞海, 赵新丽, 蒋平.  重组毛白杨4-香豆酸:辅酶A连接酶的酶学性质研究 . 北京林业大学学报, 2007, 29(5): 62-66.
    [20] 殷亚方, 张一平, 符韵林, 侯亚南, 宋小双, 马文辉, 杜华强, 龙玲, 饶良懿, 刘震, 黄国胜, 李景文, 
    王保平, 李全发, 王明枝, 杨晓晖, 张秋英, 李慧, 李景文, 熊瑾, 李梅, 杨海龙, 詹亚光, 李俊清, 张克斌, 韩海荣, 李吉跃, 范文义, 朱金兆, 朱金兆, 耿晓东, 赵敏, 徐峰, 梁机, 王洁瑛, 王雪军, 吕建雄, 窦军霞, 秦瑶, 刘文耀, 李发东, 李俊清, 李妮亚, 陆熙娴, 陈晓阳, 尹立辉, 秦素玲, 陈素文, 赵宪文, 倪春, 李凤兰, 孙玉军, 刘雪梅, 陈晓阳, 李云, 唐黎明, 毕华兴, 于贵瑞, 欧国强, 乔杰, 沈有信, 刘桂丰, 齐实, 康峰峰, 李黎, 慈龙骏, 赵双菊, 李伟, 魏建祥, 宋献方, 王玉成, 文瑞钧, 马钦彦, 张桂芹, 李伟, 韦广绥, 任海青, 王雪, 黎昌琼, 刘伦辉, 蒋建平, 朱国平, 张万军, 丁霞, 周海江, 杨谦, , 孙涛, 宋清海, 李慧, 孙晓敏, 刘莹, 孙志强, 李宗然, 
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出版历程
  • 收稿日期:  1900-01-01
  • 修回日期:  1900-01-01
  • 刊出日期:  2006-03-30

毛白杨4-香豆酸: 辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测

摘要: 为了进一步研究毛白杨4CL1的酶学特性,构建了毛白杨4CL1原核表达载体pQE31-4CL1.经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了毛白杨4CL1蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明该新蛋白的分子量为60 kD,与预测值一致.对毛白杨4-CL1蛋白在大肠杆菌中的表达体系进行了优化,确定IPTG的最佳浓度为0.4 mmol/L,诱导时的菌液密度OD600为0.3~0.5,最佳表达时间为2 h.37℃下表达的4CL1融合蛋白以包涵体的形式存在,没有生物学活性.当表达温度从37℃降低为28℃时,可溶性的有生物学活性的毛白杨4CL1蛋白诱导表达获得成功,表达量达11%.以耦联有Ni2+-NTA的琼脂糖为亲和层析填料,金属鳌合亲和柱层析一步纯化获得了电泳纯4CL1蛋白,4CL1蛋白对5种底物的比活性分别为:4-香豆酸3 949.0 pkat/mg,咖啡酸2 214.0 pkat/mg,阿魏酸715.0 pkat/mg,肉桂酸84.9 pkat/mg,而对芥子酸没有生物活性.

English Abstract

李绍才, 陈文汇, 范丙友, 朱教君, 金小娟, 时尽书, 吕建雄, 翟明普, 胡晓丽, 李世东, 孙晓梅, 王玉杰, 高峻, 谭伟, 窦军霞, 肖生春, 李发东, 杨振德, 潘存德, 颜容, 南海龙, 张冰玉, 徐双民, 张宇清, 周春江, 康宏樟, 冯仲科, 谢益民, 张一平, 三乃, 孟平, 韩海荣, 李建章, 刘红霞, 田小青, 孙海龙, 张守攻, 刘俊昌, 师瑞峰, 骆秀琴, 王云琦, 朱清科, 宋献方, 胡诗宇, 苏晓华, 肖洪浪, 蔡怀, 岳良松, 王笑山, 吴斌, 陆海, 马钦彦, 李义良, 赵博光, 姜伟, 杨志荣, 张雁, 周文瑞, 蒋佳荔, 刘昌明, 齐实, 齐实, 赵双菊, 李智辉, 何磊, 张劲松, 蒲俊文, 张永安, 宋清海, 蒋湘宁, 赵有科, 伊力塔, 朱金兆, 姚山, 葛颂, 齐力旺, 张德荣, 张岩, 于静洁, 刘元, 褚建民, 石丽萍, 杨聪, 吕守芳, 吴庆利, 曲良建, 康峰峰, 马超德, 崔保山, 刘鑫宇, 王玉珠, 王建华, 朱林峰, 刘相超, 胡堃, 田颖川, 唐常源. 毛白杨4-香豆酸: 辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测[J]. 北京林业大学学报, 2006, 28(2): 1-8.
引用本文: 李绍才, 陈文汇, 范丙友, 朱教君, 金小娟, 时尽书, 吕建雄, 翟明普, 胡晓丽, 李世东, 孙晓梅, 王玉杰, 高峻, 谭伟, 窦军霞, 肖生春, 李发东, 杨振德, 潘存德, 颜容, 南海龙, 张冰玉, 徐双民, 张宇清, 周春江, 康宏樟, 冯仲科, 谢益民, 张一平, 三乃, 孟平, 韩海荣, 李建章, 刘红霞, 田小青, 孙海龙, 张守攻, 刘俊昌, 师瑞峰, 骆秀琴, 王云琦, 朱清科, 宋献方, 胡诗宇, 苏晓华, 肖洪浪, 蔡怀, 岳良松, 王笑山, 吴斌, 陆海, 马钦彦, 李义良, 赵博光, 姜伟, 杨志荣, 张雁, 周文瑞, 蒋佳荔, 刘昌明, 齐实, 齐实, 赵双菊, 李智辉, 何磊, 张劲松, 蒲俊文, 张永安, 宋清海, 蒋湘宁, 赵有科, 伊力塔, 朱金兆, 姚山, 葛颂, 齐力旺, 张德荣, 张岩, 于静洁, 刘元, 褚建民, 石丽萍, 杨聪, 吕守芳, 吴庆利, 曲良建, 康峰峰, 马超德, 崔保山, 刘鑫宇, 王玉珠, 王建华, 朱林峰, 刘相超, 胡堃, 田颖川, 唐常源. 毛白杨4-香豆酸: 辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测[J]. 北京林业大学学报, 2006, 28(2): 1-8.
DOU Jun_xia, SHI Jin-shu, LIU Xin-yu, HU Kun, ZHANG Yi_ping, LI Jian-zhang, ZHAO Shuang_ju, TANG Chang_yuan, ZHOU Wen-rui, JING Yu-dong, ZHANG De-rong, SONG Qing_hai, 3, MA Chao-de, WU Qing-li, XU Shuang-min, 8, . Soluble prokaryotic expression of 4_coumarate: coenzyme A ligase from Populus tomentosa and enzyme activity of recombinant 4CL1[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2006, 28(2): 1-8.
Citation: DOU Jun_xia, SHI Jin-shu, LIU Xin-yu, HU Kun, ZHANG Yi_ping, LI Jian-zhang, ZHAO Shuang_ju, TANG Chang_yuan, ZHOU Wen-rui, JING Yu-dong, ZHANG De-rong, SONG Qing_hai, 3, MA Chao-de, WU Qing-li, XU Shuang-min, 8, . Soluble prokaryotic expression of 4_coumarate: coenzyme A ligase from Populus tomentosa and enzyme activity of recombinant 4CL1[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2006, 28(2): 1-8.

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