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    李绍才, 陈文汇, 范丙友, 朱教君, 金小娟, 时尽书, 吕建雄, 翟明普, 胡晓丽, 李世东, 孙晓梅, 王玉杰, 高峻, 谭伟, 窦军霞, 肖生春, 李发东, 杨振德, 潘存德, 颜容, 南海龙, 张冰玉, 徐双民, 张宇清, 周春江, 康宏樟, 冯仲科, 谢益民, 张一平, 三乃, 孟平, 韩海荣, 李建章, 刘红霞, 田小青, 孙海龙, 张守攻, 刘俊昌, 师瑞峰, 骆秀琴, 王云琦, 朱清科, 宋献方, 胡诗宇, 苏晓华, 肖洪浪, 蔡怀, 岳良松, 王笑山, 吴斌, 陆海, 马钦彦, 李义良, 赵博光, 姜伟, 杨志荣, 张雁, 周文瑞, 蒋佳荔, 刘昌明, 齐实, 齐实, 赵双菊, 李智辉, 何磊, 张劲松, 蒲俊文, 张永安, 宋清海, 蒋湘宁, 赵有科, 伊力塔, 朱金兆, 姚山, 葛颂, 齐力旺, 张德荣, 张岩, 于静洁, 刘元, 褚建民, 石丽萍, 杨聪, 吕守芳, 吴庆利, 曲良建, 康峰峰, 马超德, 崔保山, 刘鑫宇, 王玉珠, 王建华, 朱林峰, 刘相超, 胡堃, 田颖川, 唐常源. 毛白杨4-香豆酸: 辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测[J]. 北京林业大学学报, 2006, 28(2): 1-8.
    引用本文: 李绍才, 陈文汇, 范丙友, 朱教君, 金小娟, 时尽书, 吕建雄, 翟明普, 胡晓丽, 李世东, 孙晓梅, 王玉杰, 高峻, 谭伟, 窦军霞, 肖生春, 李发东, 杨振德, 潘存德, 颜容, 南海龙, 张冰玉, 徐双民, 张宇清, 周春江, 康宏樟, 冯仲科, 谢益民, 张一平, 三乃, 孟平, 韩海荣, 李建章, 刘红霞, 田小青, 孙海龙, 张守攻, 刘俊昌, 师瑞峰, 骆秀琴, 王云琦, 朱清科, 宋献方, 胡诗宇, 苏晓华, 肖洪浪, 蔡怀, 岳良松, 王笑山, 吴斌, 陆海, 马钦彦, 李义良, 赵博光, 姜伟, 杨志荣, 张雁, 周文瑞, 蒋佳荔, 刘昌明, 齐实, 齐实, 赵双菊, 李智辉, 何磊, 张劲松, 蒲俊文, 张永安, 宋清海, 蒋湘宁, 赵有科, 伊力塔, 朱金兆, 姚山, 葛颂, 齐力旺, 张德荣, 张岩, 于静洁, 刘元, 褚建民, 石丽萍, 杨聪, 吕守芳, 吴庆利, 曲良建, 康峰峰, 马超德, 崔保山, 刘鑫宇, 王玉珠, 王建华, 朱林峰, 刘相超, 胡堃, 田颖川, 唐常源. 毛白杨4-香豆酸: 辅酶A连接酶可溶性原核表达及活性检测[J]. 北京林业大学学报, 2006, 28(2): 1-8.
    DOU Jun_xia, SHI Jin-shu, LIU Xin-yu, HU Kun, ZHANG Yi_ping, LI Jian-zhang, ZHAO Shuang_ju, TANG Chang_yuan, ZHOU Wen-rui, JING Yu-dong, ZHANG De-rong, SONG Qing_hai, MA Chao-de, WU Qing-li, XU Shuang-min, . Soluble prokaryotic expression of 4_coumarate: coenzyme A ligase from Populus tomentosa and enzyme activity of recombinant 4CL1[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2006, 28(2): 1-8.
    Citation: DOU Jun_xia, SHI Jin-shu, LIU Xin-yu, HU Kun, ZHANG Yi_ping, LI Jian-zhang, ZHAO Shuang_ju, TANG Chang_yuan, ZHOU Wen-rui, JING Yu-dong, ZHANG De-rong, SONG Qing_hai, MA Chao-de, WU Qing-li, XU Shuang-min, . Soluble prokaryotic expression of 4_coumarate: coenzyme A ligase from Populus tomentosa and enzyme activity of recombinant 4CL1[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2006, 28(2): 1-8.

    Soluble prokaryotic expression of 4_coumarate: coenzyme A ligase from Populus tomentosa and enzyme activity of recombinant 4CL1

    • 摘要: 为了进一步研究毛白杨4CL1的酶学特性,构建了毛白杨4CL1原核表达载体pQE31-4CL1.经IPTG诱导在大肠杆菌中表达了毛白杨4CL1蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明该新蛋白的分子量为60 kD,与预测值一致.对毛白杨4-CL1蛋白在大肠杆菌中的表达体系进行了优化,确定IPTG的最佳浓度为0.4 mmol/L,诱导时的菌液密度OD600为0.3~0.5,最佳表达时间为2 h.37℃下表达的4CL1融合蛋白以包涵体的形式存在,没有生物学活性.当表达温度从37℃降低为28℃时,可溶性的有生物学活性的毛白杨4CL1蛋白诱导表达获得成功,表达量达11%.以耦联有Ni2+-NTA的琼脂糖为亲和层析填料,金属鳌合亲和柱层析一步纯化获得了电泳纯4CL1蛋白,4CL1蛋白对5种底物的比活性分别为:4-香豆酸3 949.0 pkat/mg,咖啡酸2 214.0 pkat/mg,阿魏酸715.0 pkat/mg,肉桂酸84.9 pkat/mg,而对芥子酸没有生物活性.

       

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