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一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因

隋金玲 李莉 张玲 王莉 刘美芹 姚娜 熊丹 郝晨 王丰俊 范丙友 孙青 雷庆哲 李艳华 胡海英 贺窑青 胡晓丹 刘丽 金莹 孙月琴 欧阳杰 程堂仁 乔海莉 周章义 李在留 陈佳 段旭良 曲红 石娟 冯秀兰 孙爱东 王建中 张艳霞 沈昕 武彦文 陈晓阳 张德权 骆有庆 冯菁 张志毅 康向阳 路端正 周燕 赵亚美 郑彩霞 李凤兰 郭锐 阎伟 陆海 尹伟伦 尹伟伦 田呈明 李云 续九如 骆有庆 陈发菊 张香 安新民 王华芳 王百田 王晓东 赵蕾 吴晓成 沈繁宜 骆有庆 李忠秋 高述民 郝俊 孙爱东 梁华军 马钦彦 武海卫 阎晓磊 卢存福 胡德夫 骆有庆 梁宏伟 胡晓丹 郑永唐 蒋湘宁 姜金仲 史玲玲 王建中 邹坤 严晓素 冯晓峰 李凯 崔彬彬

王晓楠 温秀凤3 刘玉军 王玉兵 王冬梅 郭晓萍 于京民2 张志翔 赵兵 尹伟伦 王华芳 吴坚 冯仲科 谢磊 骈瑞琪 高荣孚 王瑛 刘玉军 沈应柏 李镇宇 王玉春 陶凤杰 林善枝 张兴杰 刘艳 呼晓姝 王民中 丁霞 孙建华 杨伟光 李凤兰 张庆 陈卫平 马建海 汪植 蒋平 赵新丽 付瑞海

隋金玲, 李莉, 张玲, 王莉, 刘美芹, 姚娜, 熊丹, 郝晨, 王丰俊, 范丙友, 孙青, 雷庆哲, 李艳华, 胡海英, 贺窑青, 胡晓丹, 刘丽, 金莹, 孙月琴, 欧阳杰, 程堂仁, 乔海莉, 周章义, 李在留, 陈佳, 段旭良, 曲红, 石娟, 冯秀兰, 孙爱东, 王建中, 张艳霞, 沈昕, 武彦文, 陈晓阳, 张德权, 骆有庆, 冯菁, 张志毅, 康向阳, 路端正, 周燕, 赵亚美, 郑彩霞, 李凤兰, 郭锐, 阎伟, 陆海, 尹伟伦, 尹伟伦, 田呈明, 李云, 续九如, 骆有庆, 陈发菊, 张香, 安新民, 王华芳, 王百田, 王晓东, 赵蕾, 吴晓成, 沈繁宜, 骆有庆, 李忠秋, 高述民, 郝俊, 孙爱东, 梁华军, 马钦彦, 武海卫, 阎晓磊, 卢存福, 胡德夫, 骆有庆, 梁宏伟, 胡晓丹, 郑永唐, 蒋湘宁, 姜金仲, 史玲玲, 王建中, 邹坤, 严晓素, 冯晓峰, 李凯, 崔彬彬, 王晓楠, 温秀凤3, 刘玉军, 王玉兵, 王冬梅, 郭晓萍, 于京民2, 张志翔, 赵兵, 尹伟伦, 王华芳, 吴坚, 冯仲科, 谢磊, 骈瑞琪, 高荣孚, 王瑛, 刘玉军, 沈应柏, 李镇宇, 王玉春, 陶凤杰, 林善枝, 张兴杰, 刘艳, 呼晓姝, 王民中, 丁霞, 孙建华, 杨伟光, 李凤兰, 张庆, 陈卫平, 马建海, 汪植, 蒋平, 赵新丽, 付瑞海. 一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因[J]. 北京林业大学学报, 2007, 29(5): 67-72.
引用本文: 隋金玲, 李莉, 张玲, 王莉, 刘美芹, 姚娜, 熊丹, 郝晨, 王丰俊, 范丙友, 孙青, 雷庆哲, 李艳华, 胡海英, 贺窑青, 胡晓丹, 刘丽, 金莹, 孙月琴, 欧阳杰, 程堂仁, 乔海莉, 周章义, 李在留, 陈佳, 段旭良, 曲红, 石娟, 冯秀兰, 孙爱东, 王建中, 张艳霞, 沈昕, 武彦文, 陈晓阳, 张德权, 骆有庆, 冯菁, 张志毅, 康向阳, 路端正, 周燕, 赵亚美, 郑彩霞, 李凤兰, 郭锐, 阎伟, 陆海, 尹伟伦, 尹伟伦, 田呈明, 李云, 续九如, 骆有庆, 陈发菊, 张香, 安新民, 王华芳, 王百田, 王晓东, 赵蕾, 吴晓成, 沈繁宜, 骆有庆, 李忠秋, 高述民, 郝俊, 孙爱东, 梁华军, 马钦彦, 武海卫, 阎晓磊, 卢存福, 胡德夫, 骆有庆, 梁宏伟, 胡晓丹, 郑永唐, 蒋湘宁, 姜金仲, 史玲玲, 王建中, 邹坤, 严晓素, 冯晓峰, 李凯, 崔彬彬
, 王晓楠, 温秀凤3, 刘玉军, 王玉兵, 王冬梅, 郭晓萍, 于京民2, 张志翔, 赵兵, 尹伟伦, 王华芳, 吴坚, 冯仲科, 谢磊, 骈瑞琪, 高荣孚, 王瑛, 刘玉军, 沈应柏, 李镇宇, 王玉春, 陶凤杰, 林善枝, 张兴杰, 刘艳, 呼晓姝, 王民中, 丁霞, 孙建华, 杨伟光, 李凤兰, 张庆, 陈卫平, 马建海, 汪植, 蒋平, 赵新丽, 付瑞海. 一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因[J]. 北京林业大学学报, 2007, 29(5): 67-72.
LEI Qing-zhe, MA Jian-hai, WANG Li, XU Jiu-ru, ZHANG Yan-xia, SHI Ling-ling, WU Xiao-cheng, WEN Xiu-feng, LIU Yu-jun, , LIN Shan-zhi, . Direct cloning of differential expression genes with fulllength by a modified solid subtractive hybridization[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2007, 29(5): 67-72.
Citation: LEI Qing-zhe, MA Jian-hai, WANG Li, XU Jiu-ru, ZHANG Yan-xia, SHI Ling-ling, WU Xiao-cheng, WEN Xiu-feng, LIU Yu-jun, , LIN Shan-zhi, . Direct cloning of differential expression genes with fulllength by a modified solid subtractive hybridization[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2007, 29(5): 67-72.

一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因

详细信息
    通讯作者:

    康向阳

    陈晓阳

    尹伟伦

    李云

Direct cloning of differential expression genes with fulllength by a modified solid subtractive hybridization

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    Corresponding author: YIN Wei-lun
  • 摘要: 该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体,自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略.该策略中的所有操作步骤,包括poly (A)+mRNA的分离,cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的,操作简单易行.扣除杂交是用结合在磁珠上的以oligo(dT)为引物合成的对照材料(Driver)的cDNA第一链,直接扣除加有接头的处理材料(Tester)cDNA第二链中的共有序列.多次反复使用Driver一链与Tester二链进行杂交,能有效去除Tester二链中的共有序列.磁珠的分离能最小限度地减少每次杂交造成的损失.最后一轮扣除后的Tester二链中,含有大量差异表达序列,用Tester二链特有的接头引物进行扩增,能进一步提高扣除效率.该文选用此扣除方法,成功分离到了低温驯化沙冬青幼苗和对照苗2个群体的18个差异表达克隆,其中有4个克隆是全长cDNA序列.经序列分析发现,这些基因都与低温相关,进一步说明,该方法可用于克隆未知差异表达基因.
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    王保平, 侯亚南, 黄国胜, 李慧, 杜华强, 杨海龙, 杨晓晖, 熊瑾, 符韵林, 刘震, 李景文, 李全发, 李梅, 饶良懿, 宋小双, 龙玲, 刘文耀, 李俊清, 王雪军, 赵敏, 陆熙娴, 耿晓东, 王洁瑛, 李吉跃, 张克斌, 窦军霞, 韩海荣, 朱金兆, 秦瑶, 尹立辉, 徐峰, 吕建雄, 李妮亚, 李发东, 朱金兆, 梁机, 李俊清, 陈晓阳, 范文义, 于贵瑞, 陈素文, 沈有信, 慈龙骏, 李凤兰, 倪春, 李黎, 赵宪文, 李云, 秦素玲, 齐实, 刘雪梅, 乔杰, 康峰峰, 毕华兴, 孙玉军, 刘桂丰, 唐黎明, 欧国强, 陈晓阳, 任海青, 李伟, 文瑞钧, 韦广绥, 马钦彦, 李伟, 黎昌琼, 张桂芹, 王玉成, 赵双菊, 宋献方, 刘伦辉, 王雪, 蒋建平, 魏建祥, 朱国平, 杨谦, 丁霞, 李慧, 周海江, , 孙涛, 张万军, 宋清海, 孙志强, 刘莹, 孙晓敏, 李宗然, 
    北方梭囊孔菌漆酶基因DNA片段的克隆与序列分析 . 北京林业大学学报, 2005, 27(5): 59-64.
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出版历程
  • 收稿日期:  1900-01-01
  • 修回日期:  1900-01-01
  • 刊出日期:  2007-09-30

一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因

    通讯作者: 康向阳; 陈晓阳; 尹伟伦; 李云

摘要: 该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体,自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略.该策略中的所有操作步骤,包括poly (A)+mRNA的分离,cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的,操作简单易行.扣除杂交是用结合在磁珠上的以oligo(dT)为引物合成的对照材料(Driver)的cDNA第一链,直接扣除加有接头的处理材料(Tester)cDNA第二链中的共有序列.多次反复使用Driver一链与Tester二链进行杂交,能有效去除Tester二链中的共有序列.磁珠的分离能最小限度地减少每次杂交造成的损失.最后一轮扣除后的Tester二链中,含有大量差异表达序列,用Tester二链特有的接头引物进行扩增,能进一步提高扣除效率.该文选用此扣除方法,成功分离到了低温驯化沙冬青幼苗和对照苗2个群体的18个差异表达克隆,其中有4个克隆是全长cDNA序列.经序列分析发现,这些基因都与低温相关,进一步说明,该方法可用于克隆未知差异表达基因.

English Abstract

隋金玲, 李莉, 张玲, 王莉, 刘美芹, 姚娜, 熊丹, 郝晨, 王丰俊, 范丙友, 孙青, 雷庆哲, 李艳华, 胡海英, 贺窑青, 胡晓丹, 刘丽, 金莹, 孙月琴, 欧阳杰, 程堂仁, 乔海莉, 周章义, 李在留, 陈佳, 段旭良, 曲红, 石娟, 冯秀兰, 孙爱东, 王建中, 张艳霞, 沈昕, 武彦文, 陈晓阳, 张德权, 骆有庆, 冯菁, 张志毅, 康向阳, 路端正, 周燕, 赵亚美, 郑彩霞, 李凤兰, 郭锐, 阎伟, 陆海, 尹伟伦, 尹伟伦, 田呈明, 李云, 续九如, 骆有庆, 陈发菊, 张香, 安新民, 王华芳, 王百田, 王晓东, 赵蕾, 吴晓成, 沈繁宜, 骆有庆, 李忠秋, 高述民, 郝俊, 孙爱东, 梁华军, 马钦彦, 武海卫, 阎晓磊, 卢存福, 胡德夫, 骆有庆, 梁宏伟, 胡晓丹, 郑永唐, 蒋湘宁, 姜金仲, 史玲玲, 王建中, 邹坤, 严晓素, 冯晓峰, 李凯, 崔彬彬, 王晓楠, 温秀凤3, 刘玉军, 王玉兵, 王冬梅, 郭晓萍, 于京民2, 张志翔, 赵兵, 尹伟伦, 王华芳, 吴坚, 冯仲科, 谢磊, 骈瑞琪, 高荣孚, 王瑛, 刘玉军, 沈应柏, 李镇宇, 王玉春, 陶凤杰, 林善枝, 张兴杰, 刘艳, 呼晓姝, 王民中, 丁霞, 孙建华, 杨伟光, 李凤兰, 张庆, 陈卫平, 马建海, 汪植, 蒋平, 赵新丽, 付瑞海. 一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因[J]. 北京林业大学学报, 2007, 29(5): 67-72.
引用本文: 隋金玲, 李莉, 张玲, 王莉, 刘美芹, 姚娜, 熊丹, 郝晨, 王丰俊, 范丙友, 孙青, 雷庆哲, 李艳华, 胡海英, 贺窑青, 胡晓丹, 刘丽, 金莹, 孙月琴, 欧阳杰, 程堂仁, 乔海莉, 周章义, 李在留, 陈佳, 段旭良, 曲红, 石娟, 冯秀兰, 孙爱东, 王建中, 张艳霞, 沈昕, 武彦文, 陈晓阳, 张德权, 骆有庆, 冯菁, 张志毅, 康向阳, 路端正, 周燕, 赵亚美, 郑彩霞, 李凤兰, 郭锐, 阎伟, 陆海, 尹伟伦, 尹伟伦, 田呈明, 李云, 续九如, 骆有庆, 陈发菊, 张香, 安新民, 王华芳, 王百田, 王晓东, 赵蕾, 吴晓成, 沈繁宜, 骆有庆, 李忠秋, 高述民, 郝俊, 孙爱东, 梁华军, 马钦彦, 武海卫, 阎晓磊, 卢存福, 胡德夫, 骆有庆, 梁宏伟, 胡晓丹, 郑永唐, 蒋湘宁, 姜金仲, 史玲玲, 王建中, 邹坤, 严晓素, 冯晓峰, 李凯, 崔彬彬
, 王晓楠, 温秀凤3, 刘玉军, 王玉兵, 王冬梅, 郭晓萍, 于京民2, 张志翔, 赵兵, 尹伟伦, 王华芳, 吴坚, 冯仲科, 谢磊, 骈瑞琪, 高荣孚, 王瑛, 刘玉军, 沈应柏, 李镇宇, 王玉春, 陶凤杰, 林善枝, 张兴杰, 刘艳, 呼晓姝, 王民中, 丁霞, 孙建华, 杨伟光, 李凤兰, 张庆, 陈卫平, 马建海, 汪植, 蒋平, 赵新丽, 付瑞海. 一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因[J]. 北京林业大学学报, 2007, 29(5): 67-72.
LEI Qing-zhe, MA Jian-hai, WANG Li, XU Jiu-ru, ZHANG Yan-xia, SHI Ling-ling, WU Xiao-cheng, WEN Xiu-feng, LIU Yu-jun, , LIN Shan-zhi, . Direct cloning of differential expression genes with fulllength by a modified solid subtractive hybridization[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2007, 29(5): 67-72.
Citation: LEI Qing-zhe, MA Jian-hai, WANG Li, XU Jiu-ru, ZHANG Yan-xia, SHI Ling-ling, WU Xiao-cheng, WEN Xiu-feng, LIU Yu-jun, , LIN Shan-zhi, . Direct cloning of differential expression genes with fulllength by a modified solid subtractive hybridization[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2007, 29(5): 67-72.

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