一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因

隋金玲; 李莉; 张玲; 王莉; 刘美芹; 姚娜; 熊丹; 郝晨; 王丰俊; 范丙友; 孙青; 雷庆哲; 李艳华; 胡海英; 贺窑青; 胡晓丹; 刘丽; 金莹; 孙月琴; 欧阳杰; 程堂仁; 乔海莉; 周章义; 李在留; 陈佳; 段旭良; 曲红; 石娟; 冯秀兰; 孙爱东; 王建中; 张艳霞; 沈昕; 武彦文; 陈晓阳; 张德权; 骆有庆; 冯菁; 张志毅; 康向阳; 路端正; 周燕; 赵亚美; 郑彩霞; 李凤兰; 郭锐; 阎伟; 陆海; 尹伟伦; 尹伟伦; 田呈明; 李云; 续九如; 骆有庆; 陈发菊; 张香; 安新民; 王华芳; 王百田; 王晓东; 赵蕾; 吴晓成; 沈繁宜; 骆有庆; 李忠秋; 高述民; 郝俊; 孙爱东; 梁华军; 马钦彦; 武海卫; 阎晓磊; 卢存福; 胡德夫; 骆有庆; 梁宏伟; 胡晓丹; 郑永唐; 蒋湘宁; 姜金仲; 史玲玲; 王建中; 邹坤; 严晓素; 冯晓峰; 李凯; 崔彬彬
<DIV></DIV>; 王晓楠; 温秀凤3; 刘玉军; 王玉兵; 王冬梅; 郭晓萍; 于京民2; 张志翔; 赵兵; 尹伟伦; 王华芳; 吴坚; 冯仲科; 谢磊; 骈瑞琪; 高荣孚; 王瑛; 刘玉军; 沈应柏; 李镇宇; 王玉春; 陶凤杰; 林善枝; 张兴杰; 刘艳; 呼晓姝; 王民中; 丁霞; 孙建华; 杨伟光; 李凤兰; 张庆; 陈卫平; 马建海; 汪植; 蒋平; 赵新丽; 付瑞海

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隋金玲, 李莉, 张玲, 王莉, 刘美芹, 姚娜, 熊丹, 郝晨, 王丰俊, 范丙友, 孙青, 雷庆哲, 李艳华, 胡海英, 贺窑青, 胡晓丹, 刘丽, 金莹, 孙月琴, 欧阳杰, 程堂仁, 乔海莉, 周章义, 李在留, 陈佳, 段旭良, 曲红, 石娟, 冯秀兰, 孙爱东, 王建中, 张艳霞, 沈昕, 武彦文, 陈晓阳, 张德权, 骆有庆, 冯菁, 张志毅, 康向阳, 路端正, 周燕, 赵亚美, 郑彩霞, 李凤兰, 郭锐, 阎伟, 陆海, 尹伟伦, 尹伟伦, 田呈明, 李云, 续九如, 骆有庆, 陈发菊, 张香, 安新民, 王华芳, 王百田, 王晓东, 赵蕾, 吴晓成, 沈繁宜, 骆有庆, 李忠秋, 高述民, 郝俊, 孙爱东, 梁华军, 马钦彦, 武海卫, 阎晓磊, 卢存福, 胡德夫, 骆有庆, 梁宏伟, 胡晓丹, 郑永唐, 蒋湘宁, 姜金仲, 史玲玲, 王建中, 邹坤, 严晓素, 冯晓峰, 李凯, 崔彬彬, 王晓楠, 温秀凤3, 刘玉军, 王玉兵, 王冬梅, 郭晓萍, 于京民2, 张志翔, 赵兵, 尹伟伦, 王华芳, 吴坚, 冯仲科, 谢磊, 骈瑞琪, 高荣孚, 王瑛, 刘玉军, 沈应柏, 李镇宇, 王玉春, 陶凤杰, 林善枝, 张兴杰, 刘艳, 呼晓姝, 王民中, 丁霞, 孙建华, 杨伟光, 李凤兰, 张庆, 陈卫平, 马建海, 汪植, 蒋平, 赵新丽, 付瑞海. 一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因[J]. 北京林业大学学报, 2007, 29(5): 67-72.

引用本文:

, 王晓楠, 温秀凤3, 刘玉军, 王玉兵, 王冬梅, 郭晓萍, 于京民2, 张志翔, 赵兵, 尹伟伦, 王华芳, 吴坚, 冯仲科, 谢磊, 骈瑞琪, 高荣孚, 王瑛, 刘玉军, 沈应柏, 李镇宇, 王玉春, 陶凤杰, 林善枝, 张兴杰, 刘艳, 呼晓姝, 王民中, 丁霞, 孙建华, 杨伟光, 李凤兰, 张庆, 陈卫平, 马建海, 汪植, 蒋平, 赵新丽, 付瑞海. 一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因[J]. 北京林业大学学报, 2007, 29(5): 67-72.

LEI Qing-zhe, MA Jian-hai, WANG Li, XU Jiu-ru, ZHANG Yan-xia, SHI Ling-ling, WU Xiao-cheng, WEN Xiu-feng, LIU Yu-jun, LIN Shan-zhi, . Direct cloning of differential expression genes with fulllength by a modified solid subtractive hybridization[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2007, 29(5): 67-72.

Citation:

LEI Qing-zhe, MA Jian-hai, WANG Li, XU Jiu-ru, ZHANG Yan-xia, SHI Ling-ling, WU Xiao-cheng, WEN Xiu-feng, LIU Yu-jun, LIN Shan-zhi, . Direct cloning of differential expression genes with fulllength by a modified solid subtractive hybridization[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2007, 29(5): 67-72.

引用本文:

Citation:

LEI Qing-zhe, MA Jian-hai, WANG Li, XU Jiu-ru, ZHANG Yan-xia, SHI Ling-ling, WU Xiao-cheng, WEN Xiu-feng, LIU Yu-jun, LIN Shan-zhi, . Direct cloning of differential expression genes with fulllength by a modified solid subtractive hybridization[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2007, 29(5): 67-72.

一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因

1.
北京林业大学林木花卉遗传育种教育部重点实验室
2.
1 三峡大学生物技术研究中心2 湖北民族学院湖北省生物资源保护与利用重点实验室 3 北京林业大学生物科学与技术学院
3.
北京林业大学生物科学与技术学院
4.
1北京林业大学生物科学与技术学院2北京市野生动物保护自然保护区管理站
5.
1北京林业大学生物科学与技术学院 2山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
6.
北京林业大学生物科学与技术学院
7.
北京林业大学林木花卉遗传育种教育部重点实验室
8.
北京林业大学林木花卉遗传育种教育部重点实验室
9.
1 北京林业大学生物科学与技术学院2 清华大学化学系生命有机磷化学教育部重点实验室 3 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室
10.
1 北京林业大学林木花卉遗传育种教育部重点实验室2 中国科学院动物研究所
11.
1北京林业大学省部共建森林培育与保护教育部重点实验室2浙江省林业有害生物防治检疫局
12.
1 北京林业大学生物科学与技术学院2 北京林业大学理学院
13.
北京林业大学国家花卉工程技术研究中心2 北京林业大学图书馆3 北京林业大学林学院
14.
北京林业大学生命科学与技术学院
15.
北京林业大学林木花卉遗传育种教育部重点实验室
16.
1北京林业大学省部共建森林培育与保护教育部重点实验室2新疆森林病虫害防治检疫总 3新疆巴音郭楞蒙古自治州森林病虫害防治检疫站4新疆轮台县森林病虫害防治检疫站
17.
北京林业大学生命科学与技术学院2 北京林业大学水土保持学院3 中国科学院植物研究所
18.
北京林业大学生物科学与技术学院
19.
1 北京林业大学生物科学与技术学院2 河南科技大学农学院
20.
1 北京林业大学生物科学与技术学院2 三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室 3 中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室
21.
北京林业大学生物科学与技术学院
22.
北京林业大学省部共建森林培育与保护教育部重点实验室
23.
北京林业大学生物科学与技术学院
24.
1 北京林业大学林学院2 北京林业大学生物科学与技术学院3 内蒙古自治区鄂尔多斯市东胜区森林防护站
25.
1 北京林业大学省部共建森林培育与保护教育部重点实验室 2 国家林业局植树造林司 3 青海省森林病虫防治检疫站
26.
1 北京林业大学生物科学与技术学院2 中国农业科学院农产品加工研究所
27.
1 北京林业大学生物科学与技术学院2 西藏民族学院医学系
28.
1北京林业大学信息学院2 北京林业大学期刊编辑部3 北京市水源保护林实验工作站4 北京林业大学生物学院
29.
1 北京林业大学生物科学与技术学院 2 内蒙古农业大学林学院 3 水利部沙棘开发管理中心

详细信息

责任作者:
康向阳

陈晓阳

尹伟伦

李云

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出版历程
- 收稿日期: 1900-01-01
- 修回日期: 1900-01-01
- 刊出日期: 2007-09-30

Direct cloning of differential expression genes with fulllength by a modified solid subtractive hybridization

1.
Key Laboratory for Genetics and Breeding of Forest Trees and Ornamental Plants, Ministry of Education, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China.
2.
1 Biotechnology Research Center, China Three Gorges University, Yichang City, Hubei Province, 443002, P. R.China； 2 Key Laboratory of Biological Resources Protection and Utilization of Hubei Province, Hubei Institute for Nationalities, Enshi City, 445000, P.R.China; 3 College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University,100083, P.R.China.
3.
College of Biological Sciences and Biotechnology，Beijing Forestry University, 100083, P.R. China
4.
1 College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China; 2 Management Center of Nature Reserves for Wild Animal Protection in Beijing, 100029, P. R. China.;
5.
1 College of Biological Sciences and Biotechnology，Beijing Forestry University，100083，P. R. China； 2 Technical Center of Shandong Entry\|Exit Inspection and Quarantine Bureau，Qingdao City，266002，P. R. China.
6.
College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China.
7.
Key Laboratory for Genetics and Breeding in Forest Trees and Ornamental Plants, Ministry of Education, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China.
8.
Key Laboratory for Genetics and Breeding in Forest Trees and Ornamental Plants, Ministry of Education， Beijing Forestry Universitry，100083，P.R.China.
9.
1 College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China; 2 Key Laboratory of Bioorganic Phosphorous Chemistry & Chemical Biology, Ministry of Education, Department of Chemistry, Tsinghua University, Beijing， 100084, P. R. China; 3 State Key Laboratory of Biochemical Engineering, Institute of Process Engineering, Chinese Academy of Sciences, Beijing, 100080, P. R. China.
10.
1 Key Laboratory for Genetics and Breeding in Forest Trees and Ornamental Plants, Ministry of Education, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China; 2 Institute of Zoology, Chinese Academy of Sciences, Beijing, 100080, P. R. China.
11.
1 Key Laboratory for Silviculture and Conservation，Ministry of Education, Beijing Forestry University, 100083, P.R. China; 2 Forest Pest Control & Quarantine Bureau of Zhejiang Province, Hangzhou, 310020, P.R. China.
12.
College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China.
13.
1 National Engineering Research Center for Floriculture, Beijing Forestry University， 100083, P.R.China; 2 Beijing Foresty University Library, 100083, P.R.China; 3 College of Forestry, Beijing Forestry University, 100083, P.R.China
14.
College of Biological Sciences and Biotechnology，Beijing Forestry University，100083，P. R.China.
15.
Key Laboratory for Genetics and Breeding in Forest Trees and Ornamental Plants, Ministry of Education, Beijing Forestry University，100083, P. R. China.
16.
1 Key Laboratory for Silviculture and Conservation, Ministry of Education, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China; 2 Forest Pest Control Station of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumchi, 830000, P. R. China; 3 Forest Pest Control Station of Bayingolin Mongolia Autonomous District of Xinjiang, Korla City, 841000, P. R. China; 4 Forest Pest Control Station of Luntai County of Xinjiang, 841600, P. R. China.
17.
1 College of Biological Sciences and Biotechnology，Beijing Forestry University，100083，P.R.China； 2 School of Soil and Water Conservation，Beijing Forestry University，100083，P.R.China； 3 Institute of Botany，Chinese Academy of Sciences，Beijing，100093，P.R.China.
18.
College of Biological Sciences and Biotechnology，Beijing Forestry University，100083，P.R.China
19.
1 College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University,100083, P. R. China; 2 College of Agriculture, Henan University of Science and Technology, Luoyang City, 471003, P. R. China.
20.
1 College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University,100083, P. R. China; 2 Key Laboratory of Natural Product Research and Exploitation of Hubei Province, China Three Gorges University, Yichang City, 443002, P. R. China; 3 Laboratory of Molecular Immunopharmacology, Kunming Institute of Zoology, Chinese Academy of Sciences, 650223, P. R. China.
21.
College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, 100083, P.R.China.
22.
Key Laboratory for Silviculture and Conservation，Ministry of Education，BeijingForestry University，100083，P.R.China
23.
College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China.
24.
1 College of Forestry, Beijing Forestry University, 100083, P. R.China； 2 College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, 100083, P. R.China； 3 Station of Forest Protection, Dongsheng District, Ordos City, Inner Mongolia , 017100, P. R.China.
25.
1 Key Laboratory for Silviculture and Conservation, Ministry of Education, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China; 2 Department of Plantation and Afforestation, State Forestry Administration, Beijing, 100714, P. R. China; 3 Forest Pest Control and Quarantine Station of Qinghai Province, Xining, 810000, P. R. China.
26.
1 College of Biological Sciences and Biotechnology，Beijing Forestry University，100083，P. R. China； 2 Institute of Agrofood Science and Technology, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing, 100094，P. R. China
27.
1 College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China; 2 Department of Medicine, Tibet Institute for Nationalities, Xianyang City, Shaanxi Province, 712082, P. R. China.
28.
1 School of Information Science and Technology, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China; 2 Journal Publishing Department, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China; 3 Experimental Working Station for Water Catchments Protection Forest of Beijing, 100029, P. R. China; 4 College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, 100083, P. R. China
29.
1 College of Biological Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, 100083, P.R. China; 2 College of Forestry, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot, 010019, P.R. China; 3 China National Administration Center for Seabuckthorn Development, Beijing, 100038, P.R. China.

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Corresponding author: YIN Wei-lun

摘要

摘要: 该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体，自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略．该策略中的所有操作步骤，包括poly (A)+mRNA的分离，cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的，操作简单易行．扣除杂交是用结合在磁珠上的以oligo(dT)为引物合成的对照材料（Driver）的cDNA第一链，直接扣除加有接头的处理材料（Tester）cDNA第二链中的共有序列．多次反复使用Driver一链与Tester二链进行杂交，能有效去除Tester二链中的共有序列.磁珠的分离能最小限度地减少每次杂交造成的损失．最后一轮扣除后的Tester二链中，含有大量差异表达序列，用Tester二链特有的接头引物进行扩增，能进一步提高扣除效率．该文选用此扣除方法，成功分离到了低温驯化沙冬青幼苗和对照苗2个群体的18个差异表达克隆，其中有4个克隆是全长cDNA序列．经序列分析发现，这些基因都与低温相关，进一步说明，该方法可用于克隆未知差异表达基因．
- 固相扣除杂交 /
- 聚合酶链式反应 /
- 低温诱导基因
- solid subtractive hybridization /
- polymerase chain reaction（PCR） /
- cold_inducible genes