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一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因

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引用本文: 隋金玲, 李莉, 张玲, 王莉, 刘美芹, 姚娜, 熊丹, 郝晨, 王丰俊, 范丙友, 孙青, 雷庆哲, 李艳华, 胡海英, 贺窑青, 胡晓丹, 刘丽, 金莹, 孙月琴, 欧阳杰, 程堂仁, 乔海莉, 周章义, 李在留, 陈佳, 段旭良, 曲红, 石娟, 冯秀兰, 孙爱东, 王建中, 张艳霞, 沈昕, 武彦文, 陈晓阳, 张德权, 骆有庆, 冯菁, 张志毅, 康向阳, 路端正, 周燕, 赵亚美, 郑彩霞, 李凤兰, 郭锐, 阎伟, 陆海, 尹伟伦, 尹伟伦, 田呈明, 李云, 续九如, 骆有庆, 陈发菊, 张香, 安新民, 王华芳, 王百田, 王晓东, 赵蕾, 吴晓成, 沈繁宜, 骆有庆, 李忠秋, 高述民, 郝俊, 孙爱东, 梁华军, 马钦彦, 武海卫, 阎晓磊, 卢存福, 胡德夫, 骆有庆, 梁宏伟, 胡晓丹, 郑永唐, 蒋湘宁, 姜金仲, 史玲玲, 王建中, 邹坤, 严晓素, 冯晓峰, 李凯, 崔彬彬
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LEI Qing-zhe, MA Jian-hai, WANG Li, XU Jiu-ru, ZHANG Yan-xia, SHI Ling-ling, WU Xiao-cheng, WEN Xiu-feng, LIU Yu-jun, , LIN Shan-zhi, . Direct cloning of differential expression genes with fulllength by a modified solid subtractive hybridization[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2007, 29(5): 67-72.
Citation: LEI Qing-zhe, MA Jian-hai, WANG Li, XU Jiu-ru, ZHANG Yan-xia, SHI Ling-ling, WU Xiao-cheng, WEN Xiu-feng, LIU Yu-jun, , LIN Shan-zhi, . Direct cloning of differential expression genes with fulllength by a modified solid subtractive hybridization[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2007, 29(5): 67-72.

一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因

详细信息
    通讯作者:

    康向阳

    陈晓阳

    尹伟伦

    李云

Direct cloning of differential expression genes with fulllength by a modified solid subtractive hybridization

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    Corresponding author: YIN Wei-lun
  • 摘要: 该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体,自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略.该策略中的所有操作步骤,包括poly (A)+mRNA的分离,cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的,操作简单易行.扣除杂交是用结合在磁珠上的以oligo(dT)为引物合成的对照材料(Driver)的cDNA第一链,直接扣除加有接头的处理材料(Tester)cDNA第二链中的共有序列.多次反复使用Driver一链与Tester二链进行杂交,能有效去除Tester二链中的共有序列.磁珠的分离能最小限度地减少每次杂交造成的损失.最后一轮扣除后的Tester二链中,含有大量差异表达序列,用Tester二链特有的接头引物进行扩增,能进一步提高扣除效率.该文选用此扣除方法,成功分离到了低温驯化沙冬青幼苗和对照苗2个群体的18个差异表达克隆,其中有4个克隆是全长cDNA序列.经序列分析发现,这些基因都与低温相关,进一步说明,该方法可用于克隆未知差异表达基因.
  • [1] 吴晓娟, 鲁俊倩, 常英英, 钟姗辰, 苏晓华, 张冰玉.  AtDME1基因‘84K’杨的获得及目的基因诱导表达分析 . 北京林业大学学报, 2020, 42(6): 26-32. doi: 10.12171/j.1000-1522.20190068
    [2] 王杰, 贾月慧, 张克中, 崔金腾.  百合雌蕊中杂交亲和性与不亲和性差异表达基因分析 . 北京林业大学学报, 2017, 39(2): 82-91. doi: 10.13332/j.1000-1522.20160292
    [3] 牛春阳, 王峰, 李丹蕾, 陈俏丽, 张瑞芝.  C14 族R2R3鄄MYB 基因调控杨树抗锈菌过敏性反应 . 北京林业大学学报, 2016, 38(7): 25-32. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150499
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    [11] 周云艳, 陈建平, 杨倩, 王晓梅.