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李国平, 张煜星, 施婷婷, 李贤军, 张展羽, 程金新, 黄心渊, 王志玲, 赵俊卉, 崔彬彬, 江泽慧, 周志强, 宗世祥, 陈伟, 曹伟, 雷相东, 肖化顺, 刘志军, 周国模, 徐剑琦, 程丽莉, 刘智, 杜官本, 于寒颖, 雷霆, 张彩虹, 丁立建, 张璧光, 王海, 王正, 雷洪, 张则路, 苏淑钗, 曹金珍, 黄群策, 吴家森, 关德新, 骆有庆, 刘童燕, 李云, 张贵, 杨谦, 郝雨, 苏里坦, 张璧光, 王正, 郭广猛, 李云, 吴家兵, 姜培坤, 常亮, 方群, 宋南, 贺宏奎, 张大红, 张佳蕊, 张书香, 王勇, 刘大鹏, 张国华, 秦广雍, 黄晓丽, 张慧东, 金晓洁], 周晓燕, 许志春, 刘彤, 李文军, 陈晓光, 秦岭, 张金桐, 姜静, 高黎, 蔡学理, 李延军, 刘海龙, 苏晓华, 于兴华, 张弥, 陈燕, 姜金仲, 刘建立, 冯慧, 尹伟伦, 王德国, 王安志, 张冰玉, 陈绪和, 周梅, 成小芳, 王谦, 朱彩霞, 聂立水, 陈建伟3, 金昌杰, 张勤, 亢新刚, 冯大领, 张连生, 梁树军, 崔国发, 胡君艳, 韩士杰, 姚国龙. 核盘菌EPSP合酶基因在大肠杆菌中的表达[J]. 北京林业大学学报, 2006, 28(6): 103-108.
引用本文: 李国平, 张煜星, 施婷婷, 李贤军, 张展羽, 程金新, 黄心渊, 王志玲, 赵俊卉, 崔彬彬, 江泽慧, 周志强, 宗世祥, 陈伟, 曹伟, 雷相东, 肖化顺, 刘志军, 周国模, 徐剑琦, 程丽莉, 刘智, 杜官本, 于寒颖, 雷霆, 张彩虹, 丁立建, 张璧光, 王海, 王正, 雷洪, 张则路, 苏淑钗, 曹金珍, 黄群策, 吴家森, 关德新, 骆有庆, 刘童燕, 李云, 张贵, 杨谦, 郝雨, 苏里坦, 张璧光, 王正, 郭广猛, 李云, 吴家兵, 姜培坤, 常亮, 方群, 宋南, 贺宏奎, 张大红, 张佳蕊, 张书香, 王勇, 刘大鹏, 张国华, 秦广雍, 黄晓丽, 张慧东, 金晓洁], 周晓燕, 许志春, 刘彤, 李文军, 陈晓光, 秦岭, 张金桐, 姜静, 高黎, 蔡学理, 李延军, 刘海龙, 苏晓华, 于兴华, 张弥, 陈燕, 姜金仲, 刘建立, 冯慧, 尹伟伦, 王德国, 王安志, 张冰玉, 陈绪和, 周梅, 成小芳, 王谦, 朱彩霞, 聂立水, 陈建伟3, 金昌杰, 张勤, 亢新刚, 冯大领, 张连生, 梁树军, 崔国发, 胡君艳, 韩士杰, 姚国龙. 核盘菌EPSP合酶基因在大肠杆菌中的表达[J]. 北京林业大学学报, 2006, 28(6): 103-108.
HAN Shi-jie, CHEN Yong-liang, YU Han-ying, LIU Zhi-jun, ZHAO Feng-jun, YAO Guo-long4, ZHANG Bi-guang, , , YANG Qian, LI Xiu-ling, SHEN Ying-bai, HE Hong-kui, LI Yan_jun, ZHOU Xiao-ya, GAO Rong-fu, SU Xiao-hua2, CHEN Xu-he, JIN Chang-jie, ZHANG Bing-y, . Cloning and expression of EPSP synthase gene from Sclerotinia sclerotiorium in Escherichia coli[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2006, 28(6): 103-108.
Citation: HAN Shi-jie,
CHEN Yong-liang, YU Han-ying, LIU Zhi-jun,
ZHAO Feng-jun, YAO Guo-long4, ZHANG Bi-guang, , , YANG Qian, LI Xiu-ling, SHEN Ying-bai, HE Hong-kui, LI Yan_jun, ZHOU Xiao-ya, GAO Rong-fu, SU Xiao-hua2, CHEN Xu-he, JIN Chang-jie, ZHANG Bing-y, . Cloning and expression of EPSP synthase gene from Sclerotinia sclerotiorium in Escherichia coli[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2006, 28(6): 103-108.

核盘菌EPSP合酶基因在大肠杆菌中的表达

Cloning and expression of EPSP synthase gene from Sclerotinia sclerotiorium in Escherichia coli

  • 摘要: 不含有内含子的核盘菌arom基因已经被扩增、测序. 该基因编码五功能的AROM蛋白. 为了大量获得核盘菌AROM蛋白的结构域之一5烯醇丙酮酰莽草酸-3磷酸合酶(EPSPS),将该菌arom基因编码脱氢奎尼酸合酶(DHQS)和EPSPS两结构域的DNA序列和只编码EPSPS结构域的DNA序列分别克隆入载体pGEX-4t-2和载体pET28b中,构建了4个表达载体pGEX-DE、pGEX-E、pET-DE和pET-E, 并将其转入大肠杆菌DH5α、大肠杆菌BL21(DE3)或大肠杆菌JM109中表达. 酶活测定和SDS-PAGE分析结果显示,上述编码序列在大肠杆菌细胞内获得了表达,含有表达载体pGEX-E、pET-DE和pET-E的大肠杆菌BL21(DE3)转化子具有EPSPS的催化活性,说明核盘菌arom基因的这些DNA片段可以被单独表达. 核盘菌EPSPS异源表达系统的 建立为该酶的抑制剂设计奠定了基础.
  • [1] 吴晓娟, 鲁俊倩, 常英英, 钟姗辰, 苏晓华, 张冰玉.  AtDME1基因‘84K’杨的获得及目的基因诱导表达分析 . 北京林业大学学报, 2020, 42(6): 26-32. doi: 10.12171/j.1000-1522.20190068
    [2] 李兴芬, 苗雅慧, 孙永江, 张孟娟, 张凌云.  青杄PwPEBP基因及其启动子序列的克隆与表达分析 . 北京林业大学学报, 2019, 41(4): 8-20. doi: 10.13332/j.1000-1522.20180344
    [3] 路蒙蒙, 韩硕, 杨琦, 王俊秀, 郭惠红.  文冠果LEC1基因的克隆及表达分析 . 北京林业大学学报, 2018, 40(1): 8-16. doi: 10.13332/j.1000-1522.20170314
    [4] 杨晨阳, 于超, 马玉杰, 罗乐, 潘会堂, 张启翔.  基于SSR标记和单拷贝核基因的蔷薇属植物系统发生分析 . 北京林业大学学报, 2018, 40(12): 85-96. doi: 10.13332/j.1000-1522.20180088
    [5] 遇文婧, 宋小双, 邓勋, 平晓帆, 周琦, 刘志华.  刺激植物响应蛋白基因Epl1克隆、原核表达及功能初探 . 北京林业大学学报, 2018, 40(1): 17-26. doi: 10.13332/j.1000-1522.20170249
    [6] 黄笛, 孙明, 袁存权, 程堂仁, 王佳, 张启翔.  春黄菊族部分植物CYC2d同源基因的分离与功能初步分析 . 北京林业大学学报, 2017, 39(4): 63-71. doi: 10.13332/j.1000-1522.20170003
    [7] 孙丽丽, 刘鹏, 王志英, 梁斌, 曹传旺.  转LdOA1基因果蝇品系GSTs基因表达及对溴氰菊酯胁迫响应 . 北京林业大学学报, 2016, 38(6): 72-78. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150418
    [8] 雷恒久, 苏淑钗, 马履一, 马仲.  平欧杂交榛CBF/DREB1转录因子ChaCBF1基因的克隆与功能分析 . 北京林业大学学报, 2016, 38(10): 69-79. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150528
    [9] 曲赞霜, 钱婷婷, 侯聪, 张力杰, 魏志刚.  小黑杨碳酸酐酶家族基因表达特性分析 . 北京林业大学学报, 2015, 37(2): 94-99. doi: 10.13332/j.cnki.jbfu.2015.02.016
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    ZHAOGuang-jie, 邹大林, 李贤军, 王玉涛, 段爱国, 李吉跃, 徐文铎, 刘金福, 赵燕东, 张求慧, 李雪萍, 李雪峰, 刘常富, 王云琦, 张灿, 吴斌, 常德龙, 齐春辉, 郑凌凌, 匡文慧, 程占红, 冯夏莲, 谭炳香, 温俊宝, 洪伟, 何友均, 白陈祥, 赵广杰, 张树文, 吴斌, 何正权, 何兴元, 王玉杰, LUOWen-sheng, 韩士杰, 宋湛谦, 李增元, 韩烈保, 吴庆利, 何承忠, 张建国, 李吉跃, 翟洪波, 张路平, 余新晓, 朱天辉, 骆有庆, 梁小红, 陈发菊, 童书振, 林秦文, 张志毅, ]陈玮, 张养贞, 黄文豪, 匡秋明, 骆有庆, 刘凤芹, 李俊清, 何静, 郭忠玲, 陈尔学, ]魏晓霞, 姜伟, FurunoTakeshi, 张璧光, 许志春, 梁宏伟, 郑兴波, 崔国发, 许志春, RENQian, 安新民, 李颖, 张振明, 张军, 胡伟华, 曾会明, 庞勇, 赵桂玲, 雷渊才, 曹川健, 侯伟, 宋国正, 李凤兰, 赵广亮, 杨凯, 刘君, PaulWolfgang, 李福海, 郑杰, 张全来, 姚永刚, 董建生, 田桂芳, 张有慧, 李考学, 李永波, 赫万成, 李长明, 张世玺.  重组酶Cre基因在大肠杆菌中的高效表达及其一步纯化和活性检测 . 北京林业大学学报, 2006, 28(3): 57-60.
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出版历程
  • 收稿日期:  1900-01-01
  • 修回日期:  1900-01-01
  • 刊出日期:  2006-11-30

核盘菌EPSP合酶基因在大肠杆菌中的表达

摘要: 不含有内含子的核盘菌arom基因已经被扩增、测序. 该基因编码五功能的AROM蛋白. 为了大量获得核盘菌AROM蛋白的结构域之一5烯醇丙酮酰莽草酸-3磷酸合酶(EPSPS),将该菌arom基因编码脱氢奎尼酸合酶(DHQS)和EPSPS两结构域的DNA序列和只编码EPSPS结构域的DNA序列分别克隆入载体pGEX-4t-2和载体pET28b中,构建了4个表达载体pGEX-DE、pGEX-E、pET-DE和pET-E, 并将其转入大肠杆菌DH5α、大肠杆菌BL21(DE3)或大肠杆菌JM109中表达. 酶活测定和SDS-PAGE分析结果显示,上述编码序列在大肠杆菌细胞内获得了表达,含有表达载体pGEX-E、pET-DE和pET-E的大肠杆菌BL21(DE3)转化子具有EPSPS的催化活性,说明核盘菌arom基因的这些DNA片段可以被单独表达. 核盘菌EPSPS异源表达系统的 建立为该酶的抑制剂设计奠定了基础.

English Abstract

李国平, 张煜星, 施婷婷, 李贤军, 张展羽, 程金新, 黄心渊, 王志玲, 赵俊卉, 崔彬彬, 江泽慧, 周志强, 宗世祥, 陈伟, 曹伟, 雷相东, 肖化顺, 刘志军, 周国模, 徐剑琦, 程丽莉, 刘智, 杜官本, 于寒颖, 雷霆, 张彩虹, 丁立建, 张璧光, 王海, 王正, 雷洪, 张则路, 苏淑钗, 曹金珍, 黄群策, 吴家森, 关德新, 骆有庆, 刘童燕, 李云, 张贵, 杨谦, 郝雨, 苏里坦, 张璧光, 王正, 郭广猛, 李云, 吴家兵, 姜培坤, 常亮, 方群, 宋南, 贺宏奎, 张大红, 张佳蕊, 张书香, 王勇, 刘大鹏, 张国华, 秦广雍, 黄晓丽, 张慧东, 金晓洁], 周晓燕, 许志春, 刘彤, 李文军, 陈晓光, 秦岭, 张金桐, 姜静, 高黎, 蔡学理, 李延军, 刘海龙, 苏晓华, 于兴华, 张弥, 陈燕, 姜金仲, 刘建立, 冯慧, 尹伟伦, 王德国, 王安志, 张冰玉, 陈绪和, 周梅, 成小芳, 王谦, 朱彩霞, 聂立水, 陈建伟3, 金昌杰, 张勤, 亢新刚, 冯大领, 张连生, 梁树军, 崔国发, 胡君艳, 韩士杰, 姚国龙. 核盘菌EPSP合酶基因在大肠杆菌中的表达[J]. 北京林业大学学报, 2006, 28(6): 103-108.
引用本文: 李国平, 张煜星, 施婷婷, 李贤军, 张展羽, 程金新, 黄心渊, 王志玲, 赵俊卉, 崔彬彬, 江泽慧, 周志强, 宗世祥, 陈伟, 曹伟, 雷相东, 肖化顺, 刘志军, 周国模, 徐剑琦, 程丽莉, 刘智, 杜官本, 于寒颖, 雷霆, 张彩虹, 丁立建, 张璧光, 王海, 王正, 雷洪, 张则路, 苏淑钗, 曹金珍, 黄群策, 吴家森, 关德新, 骆有庆, 刘童燕, 李云, 张贵, 杨谦, 郝雨, 苏里坦, 张璧光, 王正, 郭广猛, 李云, 吴家兵, 姜培坤, 常亮, 方群, 宋南, 贺宏奎, 张大红, 张佳蕊, 张书香, 王勇, 刘大鹏, 张国华, 秦广雍, 黄晓丽, 张慧东, 金晓洁], 周晓燕, 许志春, 刘彤, 李文军, 陈晓光, 秦岭, 张金桐, 姜静, 高黎, 蔡学理, 李延军, 刘海龙, 苏晓华, 于兴华, 张弥, 陈燕, 姜金仲, 刘建立, 冯慧, 尹伟伦, 王德国, 王安志, 张冰玉, 陈绪和, 周梅, 成小芳, 王谦, 朱彩霞, 聂立水, 陈建伟3, 金昌杰, 张勤, 亢新刚, 冯大领, 张连生, 梁树军, 崔国发, 胡君艳, 韩士杰, 姚国龙. 核盘菌EPSP合酶基因在大肠杆菌中的表达[J]. 北京林业大学学报, 2006, 28(6): 103-108.
HAN Shi-jie, CHEN Yong-liang, YU Han-ying, LIU Zhi-jun, ZHAO Feng-jun, YAO Guo-long4, ZHANG Bi-guang, , , YANG Qian, LI Xiu-ling, SHEN Ying-bai, HE Hong-kui, LI Yan_jun, ZHOU Xiao-ya, GAO Rong-fu, SU Xiao-hua2, CHEN Xu-he, JIN Chang-jie, ZHANG Bing-y, . Cloning and expression of EPSP synthase gene from Sclerotinia sclerotiorium in Escherichia coli[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2006, 28(6): 103-108.
Citation: HAN Shi-jie,
CHEN Yong-liang, YU Han-ying, LIU Zhi-jun,
ZHAO Feng-jun, YAO Guo-long4, ZHANG Bi-guang, , , YANG Qian, LI Xiu-ling, SHEN Ying-bai, HE Hong-kui, LI Yan_jun, ZHOU Xiao-ya, GAO Rong-fu, SU Xiao-hua2, CHEN Xu-he, JIN Chang-jie, ZHANG Bing-y, . Cloning and expression of EPSP synthase gene from Sclerotinia sclerotiorium in Escherichia coli[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2006, 28(6): 103-108.

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