Optimization of Agrobacterium-mediated transformation of Rosa hybrida
-
摘要: 为了建立月季品种‘萨蔓莎’根癌农杆菌介导的遗传转化系统,我们通过衡量GUS基因瞬间表达水平,探讨了各因子对基因转化的影响.结果表明:外植体、光照条件、共培养培养基中无机盐含量及乙酰丁香酮(AS)含量是重要的影响因子;共培养时间、共培养温度及农杆菌菌液浓度对根癌农杆菌的生长以至基因转化有重要影响.优化后的转化条件为:将月季胚性愈伤组织与OD600值为0.5~0.8的农杆菌菌液侵染20min,然后在含300μmol/LAS并且无机盐减半的MS培养基上黑暗、23℃条件下共培养3d.Abstract: To develop a transformation protocol of Rosa hybrida 'Samantha' via Agrobacterium tumefaciens, the authors examined the effect of different factors on T-DNA transfer by measuring transient expression levels of an intron-containing β-glucuronidase gene. The results indicate that explant, light condition, salt concentration and acetosyringone (AS) concentration in co-culture medium are the most important factors, and factors like co-culture temperature, co-culture period and bacteria density also have a important effect on the growth of bacteria and even T-DNA transfer. Optimized co-cultivation was performed by inoculation of embryogenic callus with bacteria at a density of OD600=0.5-0.8 for 20min and co-culture in darkness at 23℃ on medium with 1/2 MS salt and 300μmol/L AS for 3d.
-
Keywords:
- Agrobacterium tumefaciens /
- Rosa hybrida /
- GUS gene /
- adventitious bud /
- embryogenic callus /
- transient expression
-
-
期刊类型引用(13)
1. 吕经娟,李淑斌,周宁宁,蹇洪英,王其刚,张颢,唐开学. ‘光叶蔷薇’器官间接再生体系的建立及GUS基因转化的初步研究. 植物科学学报. 2014(02): 139-147 . 百度学术 2. 李绍佳. 月季遗传背景研究进展. 园艺与种苗. 2012(12): 60-62 . 百度学术 3. 毕玲,刘凤栾,董爱香,周晓阳,马男,赵梁军. 狗蔷薇类原球茎遗传转化体系的建立. 核农学报. 2012(02): 270-274 . 百度学术 4. 张凌云,杨奕,邓赞. 不同因子对月季愈伤组织诱导的影响. 贵州农业科学. 2011(10): 51-53+233 . 百度学术 5. 徐婷,吴多,杨雪,付慧娟,王金刚. 紫叶酢浆草遗传转化体系优化. 黑龙江科学. 2010(02): 1-3+11 . 百度学术 6. 周蓓蓓,陈月红,章镇,陶建敏. 超声波辅助对农杆菌介导“美人指”葡萄遗传转化中GUS瞬时表达的影响. 江西农业学报. 2010(04): 6-8 . 百度学术 7. 张晓英,甘敬,尹伟伦,朱祯,王华芳. 国槐遗传转化体系的优化. 林业科学. 2009(05): 20-26+179 . 百度学术 8. 刘莉莉,刘丹,丛郁,章镇. 超声波辅助对农杆菌介导新红星苹果遗传转化中gus基因瞬间表达的影响. 江苏农业学报. 2008(02): 213-215 . 百度学术 9. 赵辉,赵润江,陈雄庭,彭明. 橡胶树高效农杆菌转化体系的建立. 热带作物学报. 2008(06): 678-683 . 百度学术 10. 孙洁,黄团,李加纳,殷家明,柴友荣,丁彩霞. 农杆菌培养方式和预培养基激素配比对甘蓝型油菜下胚轴转化效应分析. 西南大学学报(自然科学版). 2007(12): 49-53 . 百度学术 11. 瞿素萍,王继华,唐开学,张颢,王丽花,苏艳. 5个切花月季品种的叶片离体培养和再生能力的基因型效应. 西南大学学报(自然科学版). 2007(12): 108-112 . 百度学术 12. 谢伶俐,李加纳,殷家明,柴友荣,许本波,林呐. 根癌农杆菌介导转化甘蓝型油菜子叶GUS基因瞬间表达. 中国油料作物学报. 2007(01): 9-13 . 百度学术 13. 瞿素萍,王继华,张颢,王丽花,唐开学. 月季体细胞无性系及其在品种选育中的可能应用. 植物生理学通讯. 2006(05): 991-996 . 百度学术 其他类型引用(26)
计量
- 文章访问数: 2461
- HTML全文浏览量: 112
- PDF下载量: 86
- 被引次数: 39