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李果实高质量RNA提取方法的比较和优化

邵毅 罗云波 张京声 陈安均 朱本忠

邵毅, 罗云波, 张京声, 陈安均, 朱本忠. 李果实高质量RNA提取方法的比较和优化[J]. 北京林业大学学报, 2010, 32(1): 57-62.
引用本文: 邵毅, 罗云波, 张京声, 陈安均, 朱本忠. 李果实高质量RNA提取方法的比较和优化[J]. 北京林业大学学报, 2010, 32(1): 57-62.
SHAO Yi, LUO Yun-bo, ZHANG Jing-sheng, CHEN An-jun, ZHU Ben-zhong. Comparison and improvement of extraction methods for highquality RNA from plum fruits[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2010, 32(1): 57-62.
Citation: SHAO Yi, LUO Yun-bo, ZHANG Jing-sheng, CHEN An-jun, ZHU Ben-zhong. Comparison and improvement of extraction methods for highquality RNA from plum fruits[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2010, 32(1): 57-62.

李果实高质量RNA提取方法的比较和优化

Comparison and improvement of extraction methods for highquality RNA from plum fruits

  • 摘要: 李果实富含酚类和多糖,成熟李果实的总酚和总糖含量分别可达140.28 μg/g和80.75 mg/g,因此常规方法不能有效提取其RNA以进行分子生物学研究。比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的Trizol法、改良的CTAB法和高氯酸盐法提取李果实RNA的效果,结果表明高氯酸盐法效果较好。根据李果实材料的特点,进一步优化了高氯酸盐法,包括用0.1 mol/L Tris-硼酸缓冲液(pH7.4)取代0.3 mol/L Tris-HCl缓冲液(pH8.3);提取缓冲液中β-巯基乙醇的浓度由1%提高到2%,可溶性PVP的浓度由8.5%降低至1%;联合使用10%乙醇和醋酸钾以除去多糖;用12 000 ×g离心替代使用填充有玻璃丝的Centriflo柱实现分离提取缓冲液中杂质的目的等。在230、260和280 nm下测定所提取RNA的吸光值,并用提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段验证RNA的质量,结果表明:用优化了的高氯酸盐法提取李果实的RNA完整性好,杂质少,得率较高,适用于RT-PCR等后续实验,并且也适合提取其他富含酚类物质或多糖果实的RNA。

     

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出版历程
  • 收稿日期:  1900-01-01
  • 修回日期:  1900-01-01
  • 刊出日期:  2010-01-30

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