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基于毛细管电泳的柳树AFLP分子标记研究

吕金辉,  胡建军,  卢孟柱

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吕金辉, 胡建军, 卢孟柱. 基于毛细管电泳的柳树AFLP分子标记研究[J]. 北京林业大学学报, 2012, 34(1): 51-57.
引用本文: 吕金辉, 胡建军, 卢孟柱. 基于毛细管电泳的柳树AFLP分子标记研究[J]. 北京林业大学学报, 2012, 34(1): 51-57.
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Lv Jin-hui, HU Jian-jun, LU Meng-zhu. AFLP molecular marker of Salix spp. based on apillary electrophoresis[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2012, 34(1): 51-57.
Citation: Lv Jin-hui, HU Jian-jun, LU Meng-zhu. AFLP molecular marker of Salix spp. based on apillary electrophoresis[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2012, 34(1): 51-57.
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基于毛细管电泳的柳树AFLP分子标记研究

  • 1.

    林木遗传育种国家重点实验室，中国林业科学研究院林业研究所

AFLP molecular marker of Salix spp. based on apillary electrophoresis

  • 1.

    Research Institute of Forestry, Chinese Academy of Forestry, State Key Laboratory of Forest Genetics and Tree Breeding, Beijing, 100091, P. R. China.

  • 摘要: 为构建柳树遗传图谱、进行分子育种等奠定基础，以柳树为材料，基于毛细管电泳技术体系建立并优化了AFLP分子标记技术，简化了AFLP分析流程。首先提取高质量的柳树基因组DNA，对基因组进行酶切与接头连接、预扩增和选择性扩增，最后通过毛细管电泳分析各因素的影响。基因组DNA提取采用改进的CTAB法，酶切模板DNA用量450 ng，EcoRⅠ酶切2 h，MseⅠ酶切2 h，接头过夜连接，选择性扩增时dNTP浓度0.3 mmol/L，Mg 2+ 浓度1.5 mmol/L，引物浓度0.125 μmol/L，DNA聚合酶浓度0.025 U/μL，预扩增产物最适稀释倍数20倍。经过重复实验，证明建立的AFLP毛细管反应体系适用于柳树AFLP分析。
    Abstract: In this paper, we established and optimized the AFLP molecular marker technology of Salix spp. based on capillary electrophoresis as well as simplify analysis flow of AFLP in order to construct Salix spp.linkage mapping and the implement of molecular breeding.First,the highquality genomic DNA was extracted for AFLP analysis.Then the genomic DNA was completely digested by restriction enzyme and ligased with oligonucleotide adapters successfully. We got the products via preamplification and selective amplification. At last, the selective amplification products were analyzed by capillary electrophoresis. Results showed that improved CTAB method was selected to extract genomic DNA, 450 ng of genomic DNA was used in digestion with EcoRⅠ and MseⅠ for 2 hours respectively, and ligased overnight. In selective amplification, 0.3 mmol/L dNTP, 1.5 mmol/L Mg 2+ , 0.125 μmol/L primers, 0.025 U/μL polymerase and 20 times dilution of preamplification products were desirable. Through many repeats, this system has been proved to be feasible in Salix spp. AFLPcapillary electrophoresis analysis.
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    [13] 张学俭, 王岩, 侯旭, 李永慈, 孙宇瑞, 蒋佳荔, 冶民生, 何磊, 朱妍, 张文娟, 张金凤, 盖颖, 柳新伟, 高鹏, 王盛萍, 李绍才, 李云成, 贺庆棠, 谢响明, 罗菊春, 昌明, 成仿云, 王文棋, 张志强, 唐守正, 关文彬, 何静, 吴玉英, 吕建雄, 申卫军, 冯仲科, 孙海龙, 马道坤, 陆佩玲, 李吉跃, 康向阳, 崔保山, 廖学品, 张华丽, 石碧, 张桂莲, 路婷, 于晓南, 史剑波, 何权, 孙阁, 吴斌, 王军辉, 关毓秀, 张平冬, 蒋湘宁, 静洁, 李小飞, 赵广杰, 杨志荣, 赵燕东, 蒲俊文, 汪燕, 陈永国, 彭少麟, 张满良, 马克明, 孙晓霞, 王尚德, 胡文忠, 余新晓, 刘国华, 林威, 汪西林, .  一种改进的双色SDS-PAGE凝胶和可视化上样电泳方法 . 北京林业大学学报, 2006, 28(1): 103-106.
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出版历程
  • 收稿日期:  1900-01-01
  • 修回日期:  1900-01-01
  • 刊出日期:  2012-01-30

基于毛细管电泳的柳树AFLP分子标记研究

  • 1. 林木遗传育种国家重点实验室，中国林业科学研究院林业研究所
  • 收稿日期: 1900-01-01
  • 修回日期: 1900-01-01
  • 刊出日期: 2012-01-30

摘要: 为构建柳树遗传图谱、进行分子育种等奠定基础，以柳树为材料，基于毛细管电泳技术体系建立并优化了AFLP分子标记技术，简化了AFLP分析流程。首先提取高质量的柳树基因组DNA，对基因组进行酶切与接头连接、预扩增和选择性扩增，最后通过毛细管电泳分析各因素的影响。基因组DNA提取采用改进的CTAB法，酶切模板DNA用量450 ng，EcoRⅠ酶切2 h，MseⅠ酶切2 h，接头过夜连接，选择性扩增时dNTP浓度0.3 mmol/L，Mg 2+ 浓度1.5 mmol/L，引物浓度0.125 μmol/L，DNA聚合酶浓度0.025 U/μL，预扩增产物最适稀释倍数20倍。经过重复实验，证明建立的AFLP毛细管反应体系适用于柳树AFLP分析。

English Abstract

吕金辉, 胡建军, 卢孟柱. 基于毛细管电泳的柳树AFLP分子标记研究[J]. 北京林业大学学报, 2012, 34(1): 51-57.
引用本文: 吕金辉, 胡建军, 卢孟柱. 基于毛细管电泳的柳树AFLP分子标记研究[J]. 北京林业大学学报, 2012, 34(1): 51-57.
shu
Lv Jin-hui, HU Jian-jun, LU Meng-zhu. AFLP molecular marker of Salix spp. based on apillary electrophoresis[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2012, 34(1): 51-57.
Citation: Lv Jin-hui, HU Jian-jun, LU Meng-zhu. AFLP molecular marker of Salix spp. based on apillary electrophoresis[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2012, 34(1): 51-57.
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