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对香豆酰辅酶A酯生物合成及纯化方法

潘琛 任百光 盖颖

潘琛, 任百光, 盖颖. 对香豆酰辅酶A酯生物合成及纯化方法[J]. 北京林业大学学报, 2016, 38(3): 120-124. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
引用本文: 潘琛, 任百光, 盖颖. 对香豆酰辅酶A酯生物合成及纯化方法[J]. 北京林业大学学报, 2016, 38(3): 120-124. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
PAN Chen, REN Bai-guang, GAI Ying. Method of enzymatic synthesis and purification of p-coumaroyl-CoA[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2016, 38(3): 120-124. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
Citation: PAN Chen, REN Bai-guang, GAI Ying. Method of enzymatic synthesis and purification of p-coumaroyl-CoA[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2016, 38(3): 120-124. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366

对香豆酰辅酶A酯生物合成及纯化方法

doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
基金项目: 

国家自然科学基金青年项目(NSF 31300498)

详细信息
    作者简介:

    潘琛,博士生。主要研究方向:结构生物学。Email:pc.18023@hotmail.com 地址:100083 北京市海淀区清华东路 35 号北京林业大学生物学院。
    责任作者: 盖颖,博士,副教授。主要研究方向:树木生长发育。Email:gaiying@bjfu.edu.cn 地址:同上。

    潘琛,博士生。主要研究方向:结构生物学。Email:pc.18023@hotmail.com 地址:100083 北京市海淀区清华东路 35 号北京林业大学生物学院。
    责任作者: 盖颖,博士,副教授。主要研究方向:树木生长发育。Email:gaiying@bjfu.edu.cn 地址:同上。

Method of enzymatic synthesis and purification of p-coumaroyl-CoA

  • 摘要: 木质素是绿色植物生长发育所需的重要化合物之一。肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)是在木质素合成过程中,催化苯丙烷类合成途径第1步的关键酶。本文以其底物之一——对香豆酰辅酶A酯为例,以现有的辅酶A酯合成纯化的文献报道为参考,介绍经过整合改进并不断试验而得到的CCR底物的合成与纯化方法。从大肠杆菌中提取出来的重组酶4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)用于合成CCR底物,这比从植物组织中提取更易获得。提纯后的4CL可以在-80 ℃下保存3、4个月。4CL反应后的产物在2个不同梯度下通过C18反相柱进一步纯化,并用高效液相色谱仪监测。在整个纯化过程中,所有用于装载对香豆酸和对香豆酰辅酶A酯的容器都用锡箔纸完全包裹起来。最后提纯出来的产物用质谱和核磁共振检测。检测的结果表明,提纯出来的辅酶A酯单一性非常好。
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    , 冯晓峰, 沈应柏, 陈卫平, 李凤兰, 李镇宇, 张兴杰, 呼晓姝, 陶凤杰, 杨伟光, 林善枝, 刘玉军, 刘艳, 张庆, 孙建华, 王民中, 王玉春, 丁霞, 汪植, 赵新丽, 马建海, 蒋平, 付瑞海.  文冠果种皮中的香豆素类化合物及抗HIV-1活性研究 . 北京林业大学学报, 2007, 29(5): 73-83.
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    , 王华芳, 谢磊, 高荣孚, 邹坤, 赵兵, 王瑛, 李凯, 王冬梅, 王晓楠, 于京民2, 冯仲科, 吴坚, 尹伟伦, 骈瑞琪, 严晓素, 王建中, 郭晓萍, 冯晓峰, 王玉兵, 温秀凤3, 刘玉军, 丁霞, 张兴杰, 陶凤杰, 王玉春, 孙建华, 张庆, 刘玉军, 李镇宇, 李凤兰, 王民中, 刘艳, 杨伟光, 沈应柏, 林善枝, 陈卫平, 呼晓姝, 汪植, 马建海, 付瑞海, 赵新丽, 蒋平.  重组毛白杨4-香豆酸:辅酶A连接酶的酶学性质研究 . 北京林业大学学报, 2007, 29(5): 62-66.
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出版历程
  • 收稿日期:  2015-10-15
  • 刊出日期:  2016-03-31

对香豆酰辅酶A酯生物合成及纯化方法

doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
    基金项目:

    国家自然科学基金青年项目(NSF 31300498)

    作者简介:

    潘琛,博士生。主要研究方向:结构生物学。Email:pc.18023@hotmail.com 地址:100083 北京市海淀区清华东路 35 号北京林业大学生物学院。
    责任作者: 盖颖,博士,副教授。主要研究方向:树木生长发育。Email:gaiying@bjfu.edu.cn 地址:同上。

    潘琛,博士生。主要研究方向:结构生物学。Email:pc.18023@hotmail.com 地址:100083 北京市海淀区清华东路 35 号北京林业大学生物学院。
    责任作者: 盖颖,博士,副教授。主要研究方向:树木生长发育。Email:gaiying@bjfu.edu.cn 地址:同上。

摘要: 木质素是绿色植物生长发育所需的重要化合物之一。肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)是在木质素合成过程中,催化苯丙烷类合成途径第1步的关键酶。本文以其底物之一——对香豆酰辅酶A酯为例,以现有的辅酶A酯合成纯化的文献报道为参考,介绍经过整合改进并不断试验而得到的CCR底物的合成与纯化方法。从大肠杆菌中提取出来的重组酶4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)用于合成CCR底物,这比从植物组织中提取更易获得。提纯后的4CL可以在-80 ℃下保存3、4个月。4CL反应后的产物在2个不同梯度下通过C18反相柱进一步纯化,并用高效液相色谱仪监测。在整个纯化过程中,所有用于装载对香豆酸和对香豆酰辅酶A酯的容器都用锡箔纸完全包裹起来。最后提纯出来的产物用质谱和核磁共振检测。检测的结果表明,提纯出来的辅酶A酯单一性非常好。

English Abstract

潘琛, 任百光, 盖颖. 对香豆酰辅酶A酯生物合成及纯化方法[J]. 北京林业大学学报, 2016, 38(3): 120-124. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
引用本文: 潘琛, 任百光, 盖颖. 对香豆酰辅酶A酯生物合成及纯化方法[J]. 北京林业大学学报, 2016, 38(3): 120-124. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
PAN Chen, REN Bai-guang, GAI Ying. Method of enzymatic synthesis and purification of p-coumaroyl-CoA[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2016, 38(3): 120-124. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
Citation: PAN Chen, REN Bai-guang, GAI Ying. Method of enzymatic synthesis and purification of p-coumaroyl-CoA[J]. Journal of Beijing Forestry University, 2016, 38(3): 120-124. doi: 10.13332/j.1000-1522.20150366
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